产品目录

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也称酸性磷酸酯酶，是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶，被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。酸性磷酸酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

血浆中的酸性磷酸酶活性范围在2～7.9U/L，血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5～11.7U/L。精液(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶，活力可以达到87～436KU/L。

• 如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐采用孵育30分钟等较长的时间，以减小操作过程中的时间误差。同时如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。
  
• 样品溶液中须避免出现各种酸性磷酸酶抑制剂。
  
• 一管显色底物配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测，以避免试剂盒浪费。
  
• p-nitrophenol溶液对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。反应终止液有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 试剂准备：将所有试剂取出，恢复至室温使用。
  
  • 显色底物溶液：取一管显色底物，溶解于2.5mL的检测缓冲液中，充分溶解和混匀，冰上放置。新鲜配制的显色底物溶液需在6小时内使用。
    
  • 标准品工作液：取10μL p-nitrophenol溶液(10mM)，用检测缓冲液稀释至0.2mL，最终浓度为0.5mM。
• 样品准备：
  
  • 细胞或组织裂解液的准备：采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞或组织，建议使用百奥莱博的YT040 Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)裂解相关样品。如果有必要需进行适当匀浆，随后离心取上清，用于酸性磷酸酯酶的检测。
    注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存，但需避免反复冻融。
    
  • 血浆、血清和尿液的准备：血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存，但需避免反复冻融。
    
  • 样品的稀释：如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，也可以采用试剂盒中的检测
    缓冲液进行稀释。如果使用试剂盒中提供的检测缓冲液进行稀释，需注意保留足够的检测缓冲液用于试剂盒的检测过程。
• 参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和40μL，样品通常可以直接加40μL。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔或三复孔。
  

  成分	空白对照(Blank)	标准品(Standard)	样品(Sample)
  检测缓冲液	40μL	(80-x)μl	(40-y) μl
  显色底物	40μL	－	40μL
  样品	－	－	yμl
  标准品工作液	－	xμl	－

  
  
• 用枪头轻轻吹打混匀，也可借助摇床进行混匀。
  
• 37℃孵育5～10分钟。(说明：待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30分钟)
  
• 每孔加入160μL反应终止液终止反应。此时，标准品或有酸性磷酸酯酶活性的孔会呈现不同深浅的黄色。
  
• 在405nm测定吸光度。如果不能测定405nm，也可以在400～415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定，可以在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时内稳定。
  
• 酸性磷酸酶活性单位的定义：在pH4.8，37℃条件下，每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色底物产生1微摩尔
  p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。
  
• 根据酶活性定义，计算出样品中的酸性磷酸酯酶活性。